转基因品系研制


转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中,由于导入基因的表达,引起生物体的性状产生可遗传的修饰。显微注射是制作转基因斑马鱼过程中最常用的方法,它是在显微镜下将外源基因通过显微注射导入斑马鱼受精卵,注射的外源基因能够整?#31995;?#26001;马鱼受精卵的基因组中,从而建立可稳定遗传转植基因的转基因品系。转基因斑马鱼广泛应用于遗传学、发育生物学、细胞生物学、医学、环境毒理学、水产育种学等研究领域。


转基因斑马鱼制备技术服务合同—转基因表达载体的构建

技术服务流程

1 分析客户要求制备转基因斑马鱼的基因信息,启动?#26377;?#21015;以及CDS序列

2 以基因组DNA为模板克隆启动?#26377;?#21015;

3以表达质粒或总RNA为模板,通过PCR或RT-PCR,按客户要求克隆目标转基因斑马鱼的CDS(如GFP、YFP、mCherry或客户特异基因)

4 对SV40 intron 和PolyA进行克隆

5 将上述克隆元件依次重组至Tol2转座载体

转基因斑马鱼制备技术服务合同—转基因斑马鱼的建立(F1代)

技术服务流程

1 体外转录转座酶

2 将转座酶和Tol2转基因表达载体,利用显微注射技术,注射到1-细胞期斑马鱼受精卵

3 将注射后的斑马鱼受精卵孵育生长,作为转基因斑马鱼建立的FO代

4 在FO代生长至性成熟时,将每尾F0个体分别与异性别野生型性成熟个体交配,收集F1胚胎

5 当F1生长至2月龄,提取尾鳍基因组,进行基因型鉴定,筛选确定转基因鱼F1。

                     


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